Alexa Fluor 647 NHS ester，简称AF647 NHS ester，是一种广泛应用于生命科学研究中的高性能荧光标记试剂。它属于Alexa Fluor荧光染料系列，由Invitrogen（现为Thermo Fisher Scientific旗下品牌）开发，具有优异的光学性质和良好的化学活性。AF647 NHS ester特别适合用于标记蛋白质、抗体、多肽、核酸等含有游离氨基的生物大分子，在荧光显微镜、流式细胞术、免疫荧光和分子成像等领域发挥重要作用。
英文名 AF647-NHS ester tripotassium
CAS号 1453856-34-2
分子量 1070.36
分子式 C40H46K3N3O16S4
活性基团及反应机制
AF647 NHS ester含有N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS酯）活性基团，能与生物大分子中的一级氨基（通常为赖氨酸残基上的- NH2）进行亲核加成反应，形成稳定的酰胺键，实现荧光染料的共价连接。
展开剩余65%反应条件：
pH 7.0-9.0的缓冲液中效果最佳（例如PBS或碳酸盐缓冲液）
避免强酸或强碱环境
反应时间一般为30分钟至数小时，根据具体实验需求调整
注意事项：
NHS酯易水解，使用时需尽量避水，反应后及时终止
常用有机溶剂预溶解，如DMSO，以保证染料活性
主要应用领域
蛋白质和抗体标记
利用AF647 NHS ester标记蛋白质或抗体，生成荧光偶联物用于免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）及流式细胞术（FACS）分析，提供高灵敏度检测。
细胞成像和活体成像
AF647的远红激发和发射波长使其非常适合在复杂生物样品中成像，减少背景自发光，提高信噪比，广泛用于活细胞成像及体内分子成像研究。
荧光原位杂交（FISH）和分子探针
通过标记核酸探针，AF647可用于检测特定DNA或RNA序列，实现高灵敏度基因表达分析。
药物载体和纳米材料标记
荧光标记药物、纳米粒子和递送系统，追踪其体内分布和动力学行为。
多色荧光分析
由于AF647发射波长远离常用绿色和红色荧光染料，便于与其他颜色荧光染料组合，实现多色成像和多重标记。
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